שיטות חלבונים – הבדלי גרסאות

תוכן שנמחק תוכן שנוסף
Yonidebot (שיחה | תרומות)
מ בוט החלפות: לעתים;
שורה 1:
'''שיטות חלבונים''' הן טכניקות המשמשות ללימוד ולבדיקה של [[חלבון|חלבונים]]. השיטות משמשות למחקר [[ביולוגיה|ביולוגי]] בסיסי ולצורך [[אבחון רפואי]]. מאחר שלכל שיטה יתרונות וחסרונות משלה, שיטות שונות משמשות למטרות שונות, ופעמים רבות יש צורך להשתמש ביותר משיטה אחת לקבלת התוצאה הרצויה.
 
חשוב להדגיש כי לכל שיטה וריאציות בהתאם לטיב המכשור והחומרים העומדים לרשות המעבדה המבצעת את הניסויים ובהתאם לאופי החלבון הנחקר. במקרים מסוימים השיטות המהוות המשך ניסויי אחת של קודמתה, ולכן לעיתיםלעתים הן נחשבות לשלבים שונים באותה השיטה.
 
==שיטות גנטיות==
שורה 24:
* '''[[אימיונו בלוט]]''': השיטה הבסיסית למציאת חלבון, השיטה מבוססת על הספגת החלבון על ממברנת [[ניטרוצלולוזה]], חשיפת הממברנה ל[[נוגדן]] ראשוני נגד החלבון, לאחר מכן לנוגדן שניוני נגד הנוגדן הראשוני המוצמד ל[[אנזים]] [[HRP]], הוספת סובסטרט שהמגע עם HRP פולט אור וחשיפה ל[[סרט צילום]].
** '''דוט בלוט''': כאשר דוגמת החלבון מושמת על הממברנה ללא הפרדת באלקטרו פורזה השיטה היא דוט בלוט - היתרון בשיטה היא החיסכון בזמן וכמות הדוגמאות הרבות שניתן לבדוק בניסוי אחד.
** '''וסטרן בלוט (Western blot)''': הפרדת חלבונים על יד ג'ל אלקטורפורזה, בדרך כלל על ידי SDS PAGE (לעיתיםלעתים נדירות על ידי 2D ג'ל), לאחר שהחלבונים הופרדו על פי גודל או [[מטען חשמלי]] מועברים החלבונים מן הג'ל לממברנת ניטרוצלולוזה על ידי הפעלת [[שדה חשמלי]]. הממברנה עוברת תהליך אימונו בלוט. היתרון בשיטה היא שניתן לדעת את גודל החלבון הנבדק לכן פוחת חשש שהנוגדן נספח גם לחלבונים אחרים ועולה יעילות הבדיקה.
[[תמונה:ELISA.jpg|left|thumb|150px|תגובת ELISA בסיסית]]
* '''[[ELISA]]''' ראשי תיבות של Enzyme-Linked Immunosorbent Assay- בדיקת צבע אנזימטית קשורה לנוגדן: טכניקה לגילוי [[אנטיגן|אנטיגנים]] (לאו דוקא חלבונים) ב[[תמיסה]]. באופן בסיסי הבדיקה מבוססת על בסיס קשיח- בדרך כלל [[פלסטיק]], אליו נספחים אנטיגנים (בדרך כלל חלבונים). לאחר מכן נעשה שימוש לפחות בשתי נוגדנים: נוגדן ראשוני ספציפי לאנטיגן מסוים ונוגדן שניוני הנקשר לנוגדן הראשוני ומצומד ל[[אנזים]]. כאשר [[סובסטרט]] בא במגע עם האנזים הוא משנה את צבעו וכך נותן אינדיקציה לנוכחות האנטיגן, הוספת חומצה חזקה כמו [[חומצה גופרתית]] מסיימת את הראקציה. כמות הצבע שנוצרה נמדדת על ידי [[ספקטרו פוטומטר]] ב[[אורך גל]] מתאים, בצורה זאת ניתן לכמת את כמותו של אנטיגן ספציפי.