שיטות חלבונים – הבדלי גרסאות

תוכן שנמחק תוכן שנוסף
Yonidebot (שיחה | תרומות)
מ בוט החלפות: דווקא;
ברוקולי (שיחה | תרומות)
תיקון קישור לדף פירושונים
שורה 60:
[[תמונה:Cb-IgG.jpg|left|thumb|150px|'''אלקטרופורזה של חלבונים על SDS-PAGE''']]
על ידי שדה חשמלי ניתן להפריד [[מולקולה|מולקולות]] על פי מאפיינים פיזיקליים כמו גודל, משקל, או [[מטען חשמלי]]. המולקולות מונחות על [[ג'ל]], ו[[שדה חשמלי]] שמופעל גורם למולקולות לנוע בג'ל בהתאם [[מטען חשמלי|למטענן החשמלי]]. בהקשר להפרדות חלבונים ניתן להשתמש בשיטה כדי לאפיין שני משתנים: גודל החלבון ומטענו.
* '''[[SDS-PAGE]]''': השיטה המקובלת ביותר למציאת גודלם של חלבונים היא על ידי [[SDS-PAGE]]: Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis השיטה מבוססת על הרתחת חלבונים ב-[[SDSסודיום דודציל פוספט]] - מולקולת [[דטרגנט]] טעונה שלילית. SDS פותח את המבנה המרחבי של החלבונים ונותן לכל החלבונים בדוגמה מטען שלילי. הדוגמה מונחת על ג'ל [[פוליאקרילאמיד]] ליד ה[[אלקטרודה]] השלילית, עם הפעלת שדה חשמלי החלבונים נעים לכיוון האלקטרודה החיובית. החלבונים מופרדים מאחר שחלבונים כבדים נעים בג'ל לאט יותר מחלבונים קלים. לאחר ההפרדה ניתן לצבוע את כלל החלבונים בג'ל בשיטת [[קומסי בלו]] (Coomassie blue) או [[בצביעת כסף]] (Silver staining). לחילופין ניתן למצוא חלבון ספציפי בשיטת [[ווסטרן בלוט]] (ראה לעיל).
* '''[[מיקוד איזואלקטרי]] Isoelectric focusing''': שיטה המבוססת על אלקטרופורזה של חלבונים למציאת [[הנקודה האיזואלקטרית]]. דוגמת חלבונים מונחת על ג'ל פוליאקרילאמיד ללא SDS. מכיוון שהחלבונים לא עברו טיפול ב-SDS מטענם החשמלי וכושר התנועה שלהם בשדה החשמלי נקבעים על פי רצף חומצות האמינו בלבד. הג'ל בנוי ב[[גרדיאנט]] [[pH]], כאשר חלבון מגיע ל-pH הנמצא בנקודה האיזואלקטרית הוא מאבד את מטענו החשמלי ובכך מאבד את כושר התנועה.
[[תמונה:2D gel1.jpg|left|thumb|250px|ג'ל דו ממדי]]