ELISA – הבדלי גרסאות

'''ELISA (אליזה)''' ראשי תיבות של Enzyme-Linked Immunosorbent Assay- בדיקת [[צבע]] [[אנזים|אנזימטית]] קשורה ל[[נוגדן]] - טכניקה [[ביוכימיה|ביוכימית]] לגילוי [[אנטיגן|אנטיגנים]] (לאו דווקא [[חלבון|חלבונים]]) או נוגדנים ב[[תמיסה]]. באופן בסיסי הבדיקה מתבצעת על מצע קשיח - בדרך-כלל [[פלסטיק]], אליו נספחים אנטיגנים (בדרך-כלל חלבונים). לאחר מכן נעשה שימוש בשני נוגדנים לפחות: נוגדן ראשוני ספציפי לאנטיגן מסוים ונוגדן שניוני הנקשר לנוגדן הראשוני ומוצמד ל[[אנזים]]. כאשר [[סובסטרט]] בא במגע עם האנזים, מתרחשת [[תגובה כימית]] והוא משנה את צבעו וכך נותן אינדיקציה לנוכחות האנטיגן. הוספת [[חומצה]] חזקה כמו [[חומצה גופרתית]] מסיימת את התגובה. כמות ה[[צבע]] שנוצרה נמדדת על ידי [[ספקטרופוטומטר]] ב[[אורך גל]] מתאים, בצורה זאת ניתן לקבוע אם אנטיגן מסוים קיים בדוגמה או לא (אנליזה איכותית) וכן לכמת את כמותו של אנטיגן ספציפי (אנליזה כמותית).

 

* בדיקות רפואיות המצריכות דיוק מרבי והמגיעות לקנה מידה של עשרות אלפי דגימות ביום, לשם כך נעשה שימוש במכשור אוטומטי (רובוטי) שאינו מצריך התערבות אדם, בכך העבודה נעשית 24 שעות ביממה וקטן הסיכוי לשגיאות.

 

== ELISA בסיסית ==

תהליך הבדיקה מבוסס על מספר שלבים:

# [[תמיסה]] ובה אנטיגן (בדרך כלל חלבון או מספר חלבונים) מונחת על פלטה סופחת, בדרך כלל מפלסטיק. לשימוש מעבדתי נהוג להשתמש בפלטה המכילה 96 בארות, שלכל אחת ניתן להכניס דוגמה שונה.

# קריאה בספקטרופוטומטר באורך גל מתאים.

 

 

[[תמונה:BIOTIN.jpg|שמאל|ממוזער|250px|'''אלייזת סנדוויץ'- ביוטינילציה''']]

'''אלייזת סנדויץ'-''' כדי להגדיל את רגישות המבחן ניתן להשתמש באלייזת סנדוויץ': לפני הוספת האנטיגן מוסף לפלטה נוגדן הסנדוויץ', נוגדן זה ספציפי לאנטיגן הנבדק אך בניגוד לנוגדן הראשוני הוא אינו מוכר לנוגדן השניוני, לעתים נוגדן הסנדוויץ' קושר [[אפיטופ]] (אזור) שונה באנטיגן לעומת הנוגדן הראשוני. המשך השיטה זהה לשיטה הבסיסית.

'''ELISA עקיפה''' - בדיקה מכמתת חלבונים כגון בדיקת נוגדנים ב[[סרום]], בדיקות מסוג זה משמשות בין השאר לאבחון חשיפה ל[[פתוגן]] (כמו בבדיקת [[HIV]] - [[איידס]]):

# הבסיס המוצק נחשף לחלבונים אופייניים לפתוגן (במקרה של אידס לחלבוני המעטפת של הנגיף HIV-1)

# מוסף נוגדן שניוני נגד נוגדנים אנושיים, לנוגדן זה מצומד האנזים HRP. אם נוצרת תגובת צבע לאחר חשיפה לסובסטרט סביר להניח שמערכת החיסון האנושית מכירה את הפתוגן והאדם נגוע המחלה.