הבדלים בין גרסאות בדף "Real Time PCR"

נוספו 2 בתים ,  לפני 10 שנים
מ
הוספת סוגריים חסרים
מ (בוט מוסיף: fi:RT-PCR)
מ (הוספת סוגריים חסרים)
המכשיר פועל בשני שלבים: בראשון הופך אנזים מסוג [[רוורס טרנסקריפטאז]] [[mRNA]] ל-[[cDNA]]. בשלב השני עובר מקטע ה-cDNA הגברה ב-[[PCR]].
 
כדי לקבוע את כמותו של מקטע ה-[[DNA]] שעובר הגברה ([[אמפליקון]]) מכניסים למבחנה שבה נמצאים מרכיבי ריאקצית ה-PCR גם פלואורופור - חומר [[זריחה פלואורסצנטי|פלורסנטי]] דוגמת SYBR-GREEN המסתפח ל-DNA ביחס קבוע למדי לאורך ולמספר המולקולות שנמצאות במבחנות השונות. זיהוי סימון הדנ"א נעשה בעזרת מקור [[אור]], דוגמת [[לייזר]], הלוגן או לדים עם עוצמה גבוהה שגורמים לעירור (excitation) ובעקבותיו לזהירה פלורסנטית של הפלואורופור. הזהירה פלואורסצנטית מזוהה על ידי גלאי, ומועברת ל[[מחשב]] לניתוח. במחשב מותקנת תוכנה שמאפשרת לנו לקבוע מהו מספר מחזורי ה-PCR שנדרש לדוגמה להגיע לרמת פלואורסנציה משמעותית מעבר לרמת הרקע. ערך זה משמש להערכה כמותית של כמות הדוגמה.
 
בבסיס השיטה עומדת ההנחה שבכל מחזור של ה-PCR מוכפלת כמות המולקולות של תוצרי ה-PCR פי 2 בדיוק, ניתן לאמת זאת על ידי הרצת מבחנות עם מיהולים ידועים של DNA ובחינה של הפרשי המחזורים ביניהם. אם למשל מהלנו דוגמה מסוימת פי 8, יש לצפות לעיכוב של 3 מחזורים בדיוק בדוגמה במהולה (2 בחזקת 3 שווה 8).
3,175

עריכות