שיטות חלבונים – הבדלי גרסאות
תוכן שנמחק תוכן שנוסף
←גילוי חלבון ספציפי: אין צורך בקישור חיצוני - יש ערך עברי |
|||
שורה 24:
* '''[[תספיג חיסוני]]''' [[:en:Immunoblot|Immunoblot]]: השיטה הבסיסית למציאת חלבון, השיטה מבוססת על הספגת החלבון על ממברנת [[ניטרוצלולוזה]], חשיפת הממברנה ל[[נוגדן]] ראשוני נגד החלבון, לאחר מכן לנוגדן שניוני נגד הנוגדן הראשוני המוצמד ל[[אנזים]] [[HRP]], הוספת סובסטרט שהמגע עם HRP פולט אור וחשיפה ל[[סרט צילום]].
** '''[[תספיג נקודתי]]''': כאשר דוגמת החלבון מושמת על הממברנה ללא הפרדת באלקטרו פורזה השיטה היא תספיג נקודתי - היתרון בשיטה היא החיסכון בזמן וכמות הדוגמאות הרבות שניתן לבדוק בניסוי אחד.
** '''[[תספיג חלבון]]''' (
[[תמונה:ELISA.jpg|שמאל|ממוזער|150px|תגובת ELISA בסיסית]]
* '''[[ELISA]]''' ראשי תיבות של Enzyme-Linked Immunosorbent Assay- בדיקת צבע אנזימטית קשורה לנוגדן: טכניקה לגילוי [[אנטיגן|אנטיגנים]] (לאו דווקא חלבונים) ב[[תמיסה]]. באופן בסיסי הבדיקה מבוססת על בסיס קשיח- בדרך כלל [[פלסטיק]], אליו נספחים אנטיגנים (בדרך כלל חלבונים). לאחר מכן נעשה שימוש לפחות בשתי נוגדנים: נוגדן ראשוני ספציפי לאנטיגן מסוים ונוגדן שניוני הנקשר לנוגדן הראשוני ומצומד ל[[אנזים]]. כאשר [[סובסטרט]] בא במגע עם האנזים הוא משנה את צבעו וכך נותן אינדיקציה לנוכחות האנטיגן, הוספת חומצה חזקה כמו [[חומצה גופרתית]] מסיימת את הראקציה. כמות הצבע שנוצרה נמדדת על ידי [[ספקטרו פוטומטר]] ב[[אורך גל]] מתאים, בצורה זאת ניתן לכמת את כמותו של אנטיגן ספציפי.
|